¹Instituto Nacional de Epidemiología "E. Coni", Santa Fe. ²Dirección de Sanidad Animal, Min. Agricultura, Ganadería, Industria y Comercio, Avenida Pellegrini 3100, 3000 Santa Fe. ³Programa Provincial de Control de Zoonosis, Min. Salud y Medio Ambiente, Provincia de Santa Fe. ⁴Com. Micobacterias, Asoc. Arg. Veterinarios de Laboratorio Diagnóstico. ⁵Programa Nac. de Control y Erradicación de Tuberculosis GELSA SENASA, Argentina.

Bovine tuberculosis is still a serious problem both for human and animal health. Control or erradication programs should start with knowledge about the prevalence for zones to establish priorities.

The rejection of carcasses and viscera of slaughtered animals constitutes a good indicative, as long as it is reliable. Organs from 248 animals with suspicious tuberculosis lesions were obtained in 6 abattoirs and examined with bacteriological and histopathological corroboration tests in Santa Fe, Argentina. Reliability was near 89%, which certifies the responsibility of the inspectors in efforts to erradicate tuberculosis.

Palabras claves: tuberculosis, Mycobacterium bovis, decomisos, bovinos.

Key words: tuberculosis, Mycobacterium bovis, rejection, cattle.

INTRODUCCION

La tuberculosis bovina constituye aún en nuestro país un serio problema de salud humana y animal, con grandes repercusiones económicas (SENASA, S.E.A.G. y P., 1994).

Si bien desde la década del 40 prácticamente ha desaparecido la tuberculosis causada por Mycobacterium bovis (M. bovis) en humanos relacionada con la ingesta láctea, debido al hervido, pasteurización de la leche y al desarrollo de la industria láctea, aún se encuentra una proporción relativamente alta de tuberculosis de este origen entre el total de enfermos.

Las principales fuentes de infección actuales del hombre son: aerosoles en galpones o al aire libre a partir de la tos del ganado enfermo, aerosoles en los frigoríficos o cortes en las manos durante la faena (Brown y col., 1994).

La provincia de Santa Fe, en la que se realiza tipificación sistemática de los aislamientos de micobacterias, es la que presenta la prevalencia más elevada de tuberculosis causada por M. bovis en el hombre, con un promedio de 2.4% del total de las tuberculosis en los últimos 15 años (Sequeira y Latini, 1990).

En la mayoría de los pacientes se puede establecer una fuerte asociación con la condición de zoonosis laboral: empleados de frigoríficos, veterinarios, peones rurales y transportistas de ganado. En estos casos debe contarse no sólo el sufrimiento humano sino también las pérdidas económicas producidas por costos de atención médica y lucro cesante, ya que se diagnostica principalmente en el grupo de plena edad productiva.

Las cifras de pérdidas por deterioro de ganado bovino y porcino han sido estimadas, desde hace décadas, en millones de dólares anuales, debido a la disminución de producción cárnea y láctea, costos de insumos sanitarios y decomisos en frigoríficos. En estudios recientes se estimaban las pérdidas en aproximadamente 63 millones de dólares anuales (Nader y Husberg, 1988). En 1971, el Servicio de Lucha Sanitaria (SELSA), junto al Centro Panamericano de Zoonosis (CEPANZO), estimaban que un 3-4% de la población bovina total del país estaba infectada; sólo en la provincia de Buenos Aires un 60% de los rebaños lecheros poseían animales enfermos (SELSA-CEPANZO, 1971). La situación actual puede ser al menos similar, aunque no se cuenta con estudios confiables sobre el tema.

Si bien durante años se ha incentivado el control de tuberculosis en el ganado lechero, por medio de pagos preferenciales por leche de animales sanos, en la provincia de Santa Fe no se efectúan estudios sistemáticos que permitan establecer la proporción de ganado bovino y porcino o rebaños infectados. Este dato se considera indispensable para encarar programas de control y erradicación. Actualmente se está tratando de implementar un programa voluntario de erradicación, en el cual se plantea, entre otras estrategias, el fortalecimiento de la Vigilancia Epidemiológica, incorporando entre sus actividades rutinarias la investigación a partir de la inspección sanitaria en mataderos (OPS-OMS, 1993).

La prevalencia de infección puede estimarse por varios métodos. En los primeros estadíos de un programa de control, en zonas donde se estima una alta prevalencia, la magnitud puede estimarse por la proporción de lesiones tuberculosas macroscópicas durante el examen post mortem en los sitios de faena. Este dato se extrapola a la población ganadera de la zona, considerando que, además, una proporción del ganado estará infectado sin haber desarrollado aún lesiones.

Esta estimación adolece de algunos sesgos ya que depende de la edad y tipo de los animales faenados que pueden no ser representativos de la población ganadera de la región, de la proporción de animales infectados en la zona (reactores positivos) y de la confiabilidad de los profesionales y técnicos en reconocer lesiones tuberculosas.

A medida que desciende la prevalencia de animales enfermos se hacen necesarios estudios más objetivos, sensibles y específicos como la prueba tuberculínica y el cultivo y tipificación de micobacterias a partir de material linfático (Roberts, 1986; Corner, 1994).

En la provincia de Santa Fe la prevalencia de tuberculosis bovina y porcina es alta, razón por la cual en 1991 se decidió efectuar una estimación utilizando el primer método descrito. Dicho estudio fue realizado por el Ministerio de Agricultura y Ganadería, el Programa Provincial de Zoonosis, el Instituto Nacional de Epidemiología "E. Coni" y el SENASA y contemplaba el estimar la prevalencia de tuberculosis, cisticercosis, hidatidosis y distomatosis (Sequeira y col., 1993). En el cuadro 1 se resumen los hallazgos referidos a tuberculosis en la provincia de Santa Fe.

Tal como se consideró anteriormente, el estudio podría haber tenido un sesgo técnico si los profesionales y técnicos que realizaban los exámenes y decomisos no hubieran sido confiables en su diagnóstico al observar lesiones macros-cópicas en la carcasa de los animales faenados. Las experiencias al respecto han sido disímiles ya que, por una parte, en estudios realizados en otras provincias se encontró una concordancia entre diagnóstico macroscópico y aislamiento de M. bovis cercana al 54%, lo que invalidaría cualquier estimación, mientras que en un estudio piloto realizado por los autores en un frigorífico de Santa Fe, la concordancia entre lesiones y laboratorio fue superior al 90% (datos no publicados).

Por esta razón las instituciones coordinadoras consideraron conveniente realizar un estudio que permitiera establecer la confiabilidad de las estimaciones realizadas. Este estudio fue auspiciado por la Comisión de Micobacterias de la Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios Diagnósticos.

OBJETIVOS1. Determinar la concordancia del decomiso veterinario macroscópico por tuberculosis en la faena con el aislamiento y tipificación de micobacterias de los materiales decomisados y los estudios anatomopatológicos de las mismas piezas.

2. Identificar factores técnicos y operacionales que puedan mejorar el diagnóstico bacteriológico e histopatológico.

MATERIAL Y METODOS

MATERIAL. Participantes. Participaron del estudio seis frigoríficos Tipo A de la provincia de Santa Fe: CEPA de Venado Tuerto, Friar de Reconquista, Rafaela de Rafaela, Recreo de Recreo, Swift Armour de Rosario y Uncoga de Rafaela.

A cada uno de ellos se les solicitó conservar y enviar muestras de lesiones sospechosas de tuberculosis de 50 animales a partir de un momento determinado y hasta completar el número de muestras establecido. La toma de muestras se realizó durante el primer semestre de 1994.

Toma de muestras. Si bien en general se acepta que se deben tomar al menos tres muestras por animal, en lo posible nódulos linfáticos mesentéricos, bronquiales y retrofaríngeos (Corner, 1994), no se estableció un patrón de toma de muestras. La sistematización del examen post mortem se dejó a criterio de los profesionales y técnicos de cada frigorífico para evaluar la confiabilidad de los mismos en las condiciones habituales de trabajo. En general se recogieron una o dos muestras por animal sospechoso, de las que se realizaron los estudios histopatológicos y bacteriológicos.

Se consiguieron muestras de 248 animales; en 207 de ellos se tomó una sola muestra, mientras que en los restantes se obtuvieron muestras de dos lesiones.

Por inconvenientes surgidos en el frigorífico CEPA sólo se pudieron procesar muestras de 6 animales de esta procedencia. En otro frigorífico se tomaron muestras de 37 animales; en los 4 establecimientos restantes se recogieron 50 o más muestras (cuadro 3).

METODO. Recolección y conservación de las muestras. Cada una de las piezas decomisadas fue dividida en dos fracciones: una de ellas se colocó en un envase estéril con la finalidad de realizar el examen bacteriológico y la otra porción en un frasco con formol tamponado al 10% para su posterior estudio histopatológico. En los casos en que se obtuvo más de una muestra de un mismo animal, las mismas se colocaron en el mismo envase, razón por la cual la unidad de análisis de resultados se referirá a animales y no a piezas anatómicas.

Los frascos fueron rotulados con nombre del frigorífico, tipo de material, fecha de faena y número de tropa.

Durante el lapso comprendido entre la toma de muestra y el envío al laboratorio del Instituto Nacional de Epidemiología "E. Coni", que nunca fue susperior a 7 días, las muestras para bacteriología fueron conservadas a 4-6° C. En el laboratorio el material fue clasificado y conservado en congelación (-20° C) hasta el momento de procesarlo.

Examen bacteriológico. Se seleccionaron trozos de tejido de la lesión y material caseoso aledaño, los que fueron disgregados en mortero; en los casos en que se disponía de muestras de dos lesiones del mismo animal se procesaron conjuntamente. Del material disgregado se realizaron extendidos en portaobjetos, los que luego fueron coloreados por la técnica de Ziehl-Neelsen.

El resto del material se procesó para cultivo, utilizando dos técnicas de decontaminación y homogeneización: por el método de Petroff, utilizando hidróxido de sodio al 4% y con ácido sulfúrico al 4% V/V (OPS-CEPANZO, 1987). Los sedimentos obtenidos con ambas técnicas de decontaminación se sembraron en una serie de dos tubos de medio de Stonebrink y uno de medio de Lowenstein Jensen preparados en el Laboratorio del Instituto. Se optó por no sembrar los materiales sin decontaminación previa debido a que la toma de muestra no se realizó en condiciones de esterilidad.

Comprobado el desarrollo de colonias ácido-alcohol resistentes se realizaron subcultivos de las mismas en medios de Stonebrink y de Lowenstein Jensen y se determinaron las siguientes características de cultivo y pruebas bioquímicas de identificación: morfología, pigmentación, tiempo de desarrollo, medio de cultivo en el que se desarrollaron, desarrollo a temperatura ambiente, pruebas de niacina, reducción de nitrato, catalasa a 68° C, pirazinamidasa y desarrollo en hidracida del ácido tiofencarboxílico (TCH) (Kantor, 1979).

Se estableció considerar como agentes causales de enfermedad a los aislamientos de colonias de M. bovis, M. tuberculosis o de micobacterias del complejo M.A.C. aún cuando fueran de bajo número de colonias; las otras micobacterias que pudieran aislarse sólo se considerarían causales si estuvieran en muy alto número.

Examen histopatológico. Las muestras se recibieron fijadas en formol tamponado al 10%; una vez en el laboratorio de la Dirección de Sanidad Animal fueron laminadas, deshidratadas en alcoholes (70°, 80°, 90°), clarificadas en xilol e incluidas en parafina. Posteriormente se realizaron cortes de 5-8 µ en micrótomo Minot y se tiñeron con la técnica de hematoxilina eosina. Se consideraron lesiones de tuberculosis a aquellas en las que se observó inflamación granulomatosa con pequeños o grandes centros de necrosis caseosa, presencia de numerosas células epitelioides, células gigantes de Langhans, linfocitos, células plasmáticas y tejido de granulación en la periferia (granuloma tuberculoso) (Jubb y col., 1985). En los casos en los que se obtuvieron muestras de dos lesiones del mismo animal los resultados se refirieron a un solo animal.

RESULTADOS

Bacteriología. Se obtuvieron resultados positivos a la baciloscopía en 113 muestras (45.6%); en el cuadro 2 se puede observar la frecuencia de aislamientos de micobacterias en los cultivos.

Las micobacterias no patógenas fueron M. gastri, M. flavescens, M. phlei y M. triviale. No se aisló en ningún caso M. tuberculosis o M.A.C. El porcentaje de aislamiento de M. bovis en estas muestras fue similar con ambos métodos de decontaminación; en los cultivos decontaminados con ácido sulfúrico desarrolló en promedio un mayor número de colonias aunque el porcentaje de contaminación fue mayor. El alto porcentaje (84.3%) se obtuvo tomando como positivas las muestras que tuvieron desarrollo en cualquiera de los cultivos. En el cuadro 3 se relacionan los resultados de las dos técnicas bacteriológicas.

En tres muestras la baciloscopía fue positiva y en los cultivos no se aislaron micobacterias; estas muestras provenían del mismo frigorífico, hecho que se explicaría por la posible pérdida de viabilidad de los bacilos durante la toma de muestra, conservación o la decontaminación, debido a que estos métodos decontaminantes pueden llegar a destruir casi un 90% de las micobacterias.Estas consideraciones pueden aplicarse también a otras muestras que dieron resultado negativo a la baciloscopía.

Se consideraron confirmados bacteriológica-mente sólo a los animales en cuyos cultivos se aisló M. bovis, independientemente del resultado de la baciloscopía.

El rango de confirmación varió entre un 68.5% y un 96.0% (cuadro 4), exceptuando al frigorífico de menor confirmación, el promedio de los restantes alcanzó el 88%.

Con respecto a la positividad bacteriológica según tipo de material, se analizaron los resultados de muestras de 207 animales que estaban constituidas por una sola pieza decomisada (cuadro 5).

Los decomisos más frecuentes fueron los pulmonares y pleurales (123/207), un 59.4% del total; de éstos se aisló M. bovis en el 83.7% de las muestras.De los 44 ganglios linfáticos recibidos, la confirmación bacteriológica de M. bovis fue del 93.2%, la localización de mayor rendimiento (cuadro 6).