Agro Sur 35 (2): 47-49 2007

PRESENTACIÓN DE MURALES

 

EVALUACIÓN PRELIMINAR DE LAS RELACIONES INTERESPECÍFICAS EN Rhodophiala Presl. (Amaryllidaceae) MEDIANTE MARCADORES MOLECULARES ISSR

PRELIMINARY EVALUATION OF INTERSPECIFIC RELATIONSHIPS IN Rhodophalia Presl. (Amarylladecae) THROUGH ISSR MOLECULLAR MARKERS

 

Fuentes, L. 3, Schiappacasse, F. 1, Herrera, R. 2, Peñailillo, P. 2 y Vogel, H. 1

1 Facultad de Ciencias Agrarias,
2 Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología,
3 Centro de Investigación en Biotecnología Silvoagrícola (CIBS), Universidad de Talca, Casilla 747, Talca, Chile. E-mail: lfuentes@utalca.cl.
Proyecto financiado por FIA y Programa CONICYT de Centros Regionales-CIBS.

 

INTRODUCCIÓN

El género Rhodophiala Presl (Amaryllidaceae) comprende 31 especies de geófitas distribuidas en Chile, Bolivia y Argentina (Traub, 1956). En Chile, el género se extiende desde la Región de Atacama hasta la Región de Los Lagos, con una mayor diversidad de especies en la llamada zona macrobioclimática mediterránea de Luebert y Pliscoff (2006). Las especies del género Rhodophiala exhiben flores de diversos colores y formas por lo que han sido investigadas como potenciales plantas ornamentales (Muñoz et al., 2006).

Pese a lo anterior, la sistemática del género y la identificación de sus especies basada principalmente en caracteres morfológicos, es dificultosa y confusa. Una de las formas de obtener evidencia molecular de variabilidad entre especies y/o intraespecíficas es a través del estudio de secuencias repetitivas o ISSR, técnica que ofrece una rápida y simple opción para la obtención de perfiles genéticos, además de una alta reproducibilidad (Charters et al., 1996; Ge et al., 2003; Herrera et al, 2005, Shi et al., 2006)).

El objetivo de este trabajo es evaluar las relaciones interespecíficas de 7 especies chilenas del género Rhodophiala Presl, utilizando marcadores moleculares ISSR.

MATERIALES Y METODOS

Se recolectaron bulbos de poblaciones naturales de 7 especies chilenas de Rhodophiala (Cuadro 1). Los bulbos fueron plantados en macetas con un sustrato de tierra de hojas y turba en proporción 2:1 y crecidos en un invernadero frío con cubierta de polietileno y ventilación.

 
Cuadro 1. Listado de las especies investigadas y procedencia de la recolección.
Table 1. List of researched species and collect sites.
 

 

La extracción del ADN se realizó de hojas provenientes de distintos individuos de cada especie mediante el método de CTAB (Doyle y Doyle, 1990), con modificaciones (Herrera et al., 2002). La integridad del ADN fue analizada mediante geles de agarosa y el ADN cuantificado por espectrofotometría. Se generó el patrón genético por PCR, utilizando como templado 12,5 ng de ADN de cada especie y 54 partidores ISSR. Para el análisis de fingerprinting, los productos fueron separados mediante electroforesis en geles de agarosa 2 %, visualizados en un transiluminador mediante tinción con bromuro de etidio. Con el propósito de una mejor comparación de los resultados moleculares, se agregaron al estudio dos especies del género Phycella Lindl. (P. australis Rav. y Ph. ignea (Lindl.) Lindl., el grupo hermano de Rhodophiala (Meerow et al., 2000).

La variabilidad genética fue analizada por el uso de softwares: NTSYS-PC versión 2.0 (Rohlf, 1997) y FreeTree versión 0.9.1.5.0 (Pavlícek y Flegr, 2001). Para ello, se construyó una matriz de datos, basada en los perfiles electroforéticos, donde la presencia o ausencia de una banda homóloga fue marcada como 1 o 0, respectivamente. Así, se construyó un dendrograma mediante la técnica UPGMA, de manera de reflejar el índice de similitud de las muestras. Adicionalmente, se realizó un análisis de bootstrap de 1000 réplicas (Felsenstein, 1985) para evaluar el apoyo de las agrupaciones individuales mediante el programa FreeTree versión 0.9.1.5.0. Esta matriz binaria fue utilizada para realizar un análisis de ordenación (PCA) y así resolver los patrones de agrupamientos de los genotipos, para lo cual también se utilizó el software NTSYS-PC.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los partidores usados correspondieron a secuencias dinucleotídicas repetidas, en cuyos extremos se contenían tres nucleótidos diferentes del resto de la secuencia. De estas secuencias, las más frecuentes correspondieron a la combinación (AG), (TG)n, (AC)n. La secuencia (CT)n presentó escasa representación, mientras que la combinación (AT)n no generó productos de amplificación.

De los 35 partidores que generaron producto de amplificación, 10 fueron polimórficos. El análisis del patrón genético mostró que todas las especies de Rhodophiala Presl constituyen un grupo muy relacionado, a excepción de la especie Rhodophiala rhodolirion que se ubica aparte.

CONCLUSIONES

Hasta el momento, los resultados de los marcadores moleculares ISSR confirman lo sugerido por Naranjo y Poggio (2000) y por Ravenna (2003), sobre la base de estudios citológicos y morfológicos, respectivamente; acerca de rehabilitar el género Rhodolirion Phil.

REFERENCIAS

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HERRERA, R., ARIAS, M.; MOYA-LEON M.A.; PENAILILLO, P.; WILKINSON, M.J., CALIGARI, P. 2005. Genetic Variation in a Chilean Endangered Endemic: Gomortega keule (Molina) Baillon. Biodiv. Conserv. 14: 2871-2881.

HERRERA, R.; CARES, V., WILKINSON, M.; CALIGARI, P.D.S. 2002. Characterization of the genetic variation and cultivar identification of Vitis vinifera cultivars using RAPD and anchored microsatellite markers. Euphytica 124: 139-145.

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