COMUNICACIONES

Reporte de primer caso humano de aislamiento y tipificación de Brucella abortus RB 51

M. Villarroel¹, Lab. Químico; M. Grell², M. Tec. Médico; R. Saenz³, R. Med. Cir.

¹ Laboratorio Regional de Diagnósticos Servicio Agrícola y Ganadero (SAG), Osorno, Chile.
² Laboratorio de Microbiología Hospital Base Osorno, Chile
³ Hospital Base Osorno, Chile.

SUMMARY

A Brucella strain was isolated from a haemoculture of a clinically ill veterinarian practitioner, at the Laboratory of Microbiology, Hospital Base Osorno, Chile. This strain was identified as Brucella abortus RB 51 at Laboratorio de Diagnósticos from the Servicio Agrícola y Ganadero (SAG), Osorno, based mainly in the following characteristics: resistence to Rifampicin, aerobic growth and the production of only rough colonies. The strain RB 51 was confirmed by PCR analysis.

Palabras claves: Brucella RB 51, humano, aislamiento.

Key words: Brucella RB 51, man, isolation.

INTRODUCCION

La Brucelosis es una zoonosis de distribución mundial, producida por una bacteria del género Brucella, entre las cuales se conocen las siguientes especies: B. abortus, B. melitensis. B. suis, B. ovis, B. canis, B. neotomae. Son microorganismos pequeños, bacilos cortos, cocobacilos o cocoides, aeróbicos, aunque algunas especies como la B. abortus necesitan de un 5 a 10% de CO₂ en su primer aislamiento. Las colonias en un medio claro como el agar suero dextrosa, son pequeñas, translúcidas, convexas, circulares, de bordes enteros, a la luz reflejada son brillantes y ligeramente opalescentes.

B. abortus fue aislada por primera vez en Dinamarca por Bang en 1897 y es el agente causal de la Brucelosis bovina. Es un patógeno intracelular, facultativo, capaz de multiplicarse y sobrevivir en una variedad de células del húesped, en particular, las células fagocíticas o macrófagos (Villamil y col., 1995).

Las cepas lisas del género Brucella, poseen en su pared celular lipopolisacáridos (LPS), los cuales mediante su porción lipídica son responsables de la endotoxicidad del gérmen, en tanto que la porción sacárida está constituida por dos fracciones, una corta y otra larga denominada cadena O, que corresponde al antígeno inmunodominante que provoca la formación de anticuerpos (Rojas y Contreras, 1997).

B. abortus RB 51 es la vacuna para la Brucelosis usada actualmente en el país, producida en Denver, Colorado, USA, por Colorado Serum Company. Es una cepa mutante de la cepa lisa de B. abortus 2308, virulenta, que se atenuó por sucesivos pasajes en medios conteniendo Rifampicina, de esta manera se logró obtener una cepa rugosa (ausencia de cadena O), atenuada y estable. Por no poseer en su pared celular la cadena O, que es el epítope inmunodominante, contra el cual se generan los anticuerpos detectables con las pruebas rutinarias más utilizadas en diagnóstico (Rosa de Bengala, Rivanol, Fijación del Complemento y Elisa), ellas dan resultados negativos.

La vacunación con cepa de B. abortus RB 51 genera una respuesta inmune de naturaleza celular, la cual realmente produce la protección. En cambio, una cepa lisa de B. abortus como la C 19, genera dos tipos de respuesta en el animal vacunado, una de carácter humoral, ya que contiene la cadena O (productora de anticuerpos), y otra celular que produce la inmunidad, interfiriendo, la primera, en el diagnóstico tendiente a pesquisar animales infectados.

CASO CLINICO Y AISLAMIENTO

El aislamiento de la bacteria se obtuvo en el mes de junio de 1999, a partir de uno de los tres hemocultivos seriados practicados al paciente, un médico veterinario de 27 años de edad, que presentaba sintomatología clínica sugerente de Brucelosis: fiebre recurrente (hasta 39°C), decaimiento, anorexia, osteomialgias, sudoración nocturna y cefalea, principalmente. Se realizaron paralelamente pruebas de aglutinación para Brucelosis, Fiebre Tifoidea, Paratifoidea, con resultados negativos.

Los hemocultivos fueron incubados en equipo automatizado (BACTEC). A las 72 horas de incubación se obtuvo positividad en uno de ellos. El Gram directo del hemocultivo, con presencia de cocobacilos Gram negativos muy pequeños, orientó a resembrar la muestra en medios de cultivo enriquecidos.

Se subcultivó en Agar Columbia, Agar Chocolate y Haemophilus Test Medium (HTM de Oxoid), con atmósfera de 5 a 10% de CO_2. A las colonias desarrolladas se les realizaron, además de la caracterización de ellas y el Gram, pruebas bioquímicas de Oxidasa y Ureasa, resultando ambas positivas. Con los antecedentes antes mencionados, se emitió un primer informe presuntivo de identificación de Brucella sp. La cepa se envió al Instituto de Salud Pública (Santiago, Chile) y al Laboratorio Regional de Diagnósticos del Servicio Agrícola y Ganadero (SAG), Osorno.

TIPIFICACION

En el Laboratorio Regional SAG Osorno, la cepa en estudio se resembró en un medio de cultivo de Farrell, selectivo para Brucella (Farrell y Robinson, 1972), usando Agar Brucella como medio base, al que se le agregó para 500 ml. un frasco de suplemento selectivo para Brucella (OXOID) conteniendo los siguientes antibióticos: Polimixina B,2.500 U.I; Bacitracina, 12.500 U.I; Cicloheximida, 50 mg, Acido Nalidíxico, 2,5 mg, Nistatina, 50.000 U.I y Vancomicina 10 mg, además se le adicionó, a los 50°C y antes de distribuir en placas Petri, un 10% de suero bovino libre de anticuerpos anti-Brucella, estéril e inactivado a 56°C por 30 minutos y 5% de glucosa estéril. Se sembró también en Agar sangre; ambos cultivos se incubaron a 37°C tanto en microaerofilia como en aerobiosis.

Una vez que se obtuvo la cepa pura, se le practicaron las pruebas de rutina para la identificación del germen, observación de colonias y tinción de Gram para observar la morfología de la bacteria, las cuales correspondían al género Brucella. En seguida se realizaron las siguientes pruebas: oxidasa, ureasa, catalasa, aglutinación con sueros monoespecíficos de B. abortus y con suero polivalente de Brucella (mezcla de varias especies de Brucella incluyendo una cepa rugosa) (López, 1989). Al concluir que se trataba de una cepa de Brucella, se procedió a la tipificación, sembrándola en medios con colorantes, en la concentración más indicada (López, 1989).

RESULTADOS Y DISCUSION

Las pruebas básicas realizadas y sus resultados fueron:

Las pruebas para diferenciarla de la B. abortus cepa de campo, dieron los siguientes resultados:

Con estos resultados se emitió el informe de aislamiento de cepa de B. abortus RB 51, la que posteriormente se envió a Virginia Tech, EEUU, para la confirmación del diagnóstico con pruebas biomoleculares (PCR) el cual determinó que la cepa aislada era la RB 51. Esto constituye el primer informe a nivel mundial de un aislamiento de B. abortus RB 51 en humanos.

Dado el riesgo para el operador de esta vacuna, es altamente recomendable la adopción de medidas protectivas adecuadas. Debido a que el conocimiento del agente causal y cuadro clínico de esta enfermedad son relativamente poco conocidos por los médicos tratantes, el mismo paciente debería señalar su nivel de riesgo en la anamnesis que se le practique.

RESUMEN

En el Laboratorio de Microbiología del Hospital Base de Osorno, se aisló una cepa de Brucella sp, que posteriormente se tipificó en el Laboratorio Regional de Diagnósticos del Servicio Agrícola y Ganadero, SAG Osorno. Esta cepa fue aislada de un hemocultivo realizado a un paciente con sintomatología clínica compatible con Brucelosis.

El resultado de la tipificación fue Brucella abortus RB 51, cepa vaccinal que se presumía apatógena para el hombre. Este es el primer reporte a nivel mundial de un aislamiento de B. abortus RB 51 en humanos.

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Aceptado: 19.05.2000

BIBLIOGRAFIA

ALTON, G., L. JONES, D. PIETZ. 1976. Las técnicas de laboratorio en la Brucelosis. 2^nd ed. Organismo Mundial de la Salud. Ginebra, 175 pp.

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LOPEZ, A. 1989. Manual de Técnicas y Procedimientos para el estudio de la Brucelosis. Secretaría de la Salud. Dirección General de Epidemiología. Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos "Dr. Manuel Martínez Baez". Mexico. DF, 28 pp.

ROJAS, X., A. CONTRERAS. 1997. Vacunas contra Brucelosis. Revista Sociedad Chilena de Buiatría. Buiatría Bovinos. 5: 16-20.

VILLAMIL, M; E. RUEDA, Y. GALLEGO, O. MARIÑO, A. GUTIERREZ DE GERARDINO, 1995. Respuesta inmune humoral y celular en cobayos inmunizados con proteínas de membrana externa de Brucella abortus Cepa RB 51. Arch. Med. Vet. 27: 77-84 N° Extraordinario.