Obtención de inmunoglobulinas de yema de huevo contra Helicobacter pylori producidos en gallinas araucanas

Resumo

Helicobacter pylori es el agente causal de diversas patologías gastroduodenales, con una prevalencia a nivel mundial de 50% y en Chile de 73-76%, haciendo necesario tratamientos más eficientes para su erradicación. Este estudio contempló la inoculación intramuscular de gallinas araucanas con lisados completos de dos cepas de H. pylori con diferente genotipo de virulencia: cepa ATCC 43504 (cagA+, vacAs1m1, dupA-) y cepa J99 (ATCC 70824) (cagA+, vacAs1m1, dupA+), respectivamente asociadas a desarrollo de cáncer gástrico y úlcera duodenal. Se realizó el aislamiento de IgY desde la yema de los huevos recolectados, basado principalmente en ultrafiltración y precipitación con sulfato de amonio al 40%. Mediante cromatografía de adsorción tiofílica (TAC) se purificaron las IgY anti-H. pylori de las cepas J99 y 43504, obteniendo así las fracciones eluida-pico II y eluida-pico III. El rango de concentración proteica de estas inmunoglobulinas fue de 0,3 a 5,4 mg/mL. Mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en ambiente reductor (SDS-PAGE) y western blot (WB) se observó una banda de 67 KDa (cadena pesada de IgY) de las inmunoglobulinas de ambas cepas. El título de anticuerpos, mediante ELISA indirecto (ELISA-I), para IgY anti-H. pylori de las cepas J99 y 43504 fue mayor a 1/6.400. En la prueba de reacción cruzada entre los anticuerpos aviares con diversas bacterias hubo diferencias significativas. En los ensayos profilácticos y terapéuticos in vitro utilizando una línea celular de adenocarcinoma gástrico (AGS), la fracción eluida-pico III de IgY desafiada con H. pylori demostró una alta eficiencia protectora contra ambas cepas de H. pylori.