Utilización de lectina Pisum sativum y yoduro de propidio para la evaluación rápida de integridad de acrosoma en espermatozoides caprinos

Resumo

La lectina Pisum sativum (PSA) ha sido usada exitosamente como marcador de glicoconjugados localizados en la membrana acrosomal interna, pero debido a las variaciones en los constituyentes de membranas existentes entre especies, su utilización requiere una validación preliminar. Este estudio compara los resultados obtenidos en la tinción acrosomal con una combinación de yoduro de propidio (PI) y PSA con la tinción Rosa de Bengala que se utiliza corrientemente como estándar, y además compara la interpretación de los resultados obtenidos con la tinción PI/PSA por dos evaluadores independientes.

En el experimento 1, semen de chivos fue colectado por vagina artificial, lavado del plasma seminal y teñido comparativamente con PI/PSA y con Rosa de Bengala, inicialmente en forma directa después de la colección y posteriormente luego de preparar fracciones con diferente proporción de espermatozoides vivos y muertos. En el experimento 2, semen de diferentes chivos congelado a -196° C en el diluyente a base de Tris, citrato y yema de huevo, fue descongelado a 37° C por 30 seg ó a 65° C por 5 seg y los espermatozoides fueron teñidos con PI/PSA. La interpretación de los resultados de integridad de acrosoma fue realizada por dos evaluadores independientes. Para comparar los resultados los porcentajes fueron transformados y las medias y correlaciones fueron calculadas por medio del paquete estadístico Systat^®.

Los resultados muestran que la tinción PI/PSA y Rosa de Bengala da resultados similares y positivamente correlacionados (r = 0.99) y que la interpretación de los evaluadores también fue positivamente correlacionada (r = 0.98). De acuerdo a lo anterior, se concluye que la tinción PI/PSA es útil para la evaluación rápida de integridad de acrosoma en caprinos.